Een snelle en gevoelige fluorescentiebiosensor op base van plasmonische PCR
Gevoeligheid en toepassingen van de PCR Single-Strand Conformation Polymorphism-methode
La PCR Single-Strand Conformation Polymorphism est une méthode utilisée pour identifier et détecter des mutations et est maintenant bien connue pour ses nombreuses functions sur les êtres vivants. Cet article discutera des détails expérimentaux, des limites et de la sensibilité de la méthode PCR de polymorphisme de conformation monobrin par rapport à toute la littérature existante à notre disposition jusqu’à aujourd’hui. Les situations d’extraction d’ADN génomique, d’amplification PCR et de polymorphisme de conformation easy brin (focus d’électrophorèse sur gel de polyacrylamide, traitement de dissociation de l’ADN double brin) et la comparaison avec le polymorphisme de longueur de fragment de restriction PCR sont présentées.
Depuis sa découverte en 1989 , il y a eu de nombreuses variantes, improvements et modifications de la méthode, ce qui la rend très facile, sûre, rapide et pour cette raison largement appliquée dans le diagnostic clinique, la médecine légale, biochimique, vétérinaire, microbiologique, alimentaire et laboratoires environnementaux. L’une des functions possibles de la méthode est le diagnostic et l’identification de mutations dans de nouvelles souches de coronavirus, automotive la science a besoin de plus d’outils pour s’attaquer au problème de cette pandémie. La méthode PCR de polymorphisme de conformation monobrin peut être appliquée dans de nombreux cas à situation que des échantillons de contrôle soient disponibles et que les situations requises de la méthode soient remplies.
Beheer van pediatrische niet-pathogene bloedculturen na introduction van PCR-technologie
Contexte : L’identification rapide des organismes signalés dans les hémocultures positives par réaction en chaîne par polymérase (PCR) peut identifier avec précision une bactérie non pathogène et réduire le temps d’identification définitive, par rapport aux méthodes microbiologiques traditionnelles. Remark cette technologie affecte la gestion clinique et antimicrobienne chez les enfants avec des bactéries non pathogènes identifiées dans une hémoculture sans aide à la décision n’a pas été évaluée.
Méthodes : Une étude rétrospective de la gestion des enfants avec des résultats d’hémoculture positifs pour les organismes non pathogènes avant et après la mise en œuvre de la technologie PCR. La gestion des antibiotiques de chaque cohorte, la fréquence des cultures répétées et les visites de retour à un service d’urgence (ED) ont été comparées.
Résultats : Au complete, 136 sufferers pendant cette période (49 % [ n = 67] pré-PCR et 51 % [ n = 69] post-PCR) ont eu une hémoculture constructive pour la bactérie non pathogène. Les sufferers admis ont eu un deuxième échantillon envoyé pour take a look at à moins d’events ( P = 0,04) ; cependant, l’exposition totale aux antibiotiques ne différait pas significativement ( P = 0,3) après l’introduction de la technologie PCR. Il n’y avait pas de différence significative dans la durée du séjour après l’intervention ( P = 0,12). Les sufferers sortis directement du service d’urgence ont eu moins de visites de retour ( P = .02) et ont reçu moins d’hémocultures répétées ( P = .04), et les antibiotiques ont été administrés à moins d’events après le retour ( P = .04) après l’introduction de la technologie PCR.
Conclusions : Avec l’ ajout de la technologie PCR , les sufferers ayant des hémocultures positives pour les bactéries non pathogènes ont reçu moins d’antibiotiques, moins d’hémocultures répétées et moins d’évaluations répétées à l’urgence.
Description: A polyclonal antibody raised in Rabbit that recognizes and binds to Human GPR81 (C-term). This antibody is tested and proven to work in the following applications:
Description: A polyclonal antibody raised in Rabbit that recognizes and binds to Human FKSG80 / GPR81 (C-Terminus). This antibody is tested and proven to work in the following applications:
Description: A polyclonal antibody raised in Rabbit that recognizes and binds to Human FKSG80 / GPR81 (N-Terminus). This antibody is tested and proven to work in the following applications:
ARP79587_P050-25UL - GPR81 Antibody - middle region
Description: A polyclonal antibody raised in Rabbit that recognizes and binds to Human FKSG80 / GPR81 (Extracellular Domain). This antibody is tested and proven to work in the following applications:
Description: GPR81 agonist 1 is a potent and highly selective GPR81 agonist, with EC50s of 58 nM and 50 nM for human and mouse GPR81, respectively. GPR81 agonist 1 inhibits lipolysis in differentiated 3T3-L1 adipocytes. GPR81 agonist 1 suppresses lipolysis in mice without cutaneous flushing. GPR81 agonist 1 displays remarkable selectivity for GPR81 over GPR109a[1].
Een nieuwe methode om binaire CRISPR-vectoren te construeren voor plantentransformatie door een enkele ronde van PCR-amplificatie
CRISPR/Cas9 est un outil établi et versatile pour l’édition du génome. Cependant, la plupart des méthodes utilisées pour générer des clones d’expression pour le CRISPR/Cas9 prennent du temps . Par conséquent, nous avons développé un protocole en une étape pour introduire des cassettes d’expression sgRNA directement dans des vecteurs binaires (Liu et al. , 2020). Dans cette approche, nous avons optimisé la PCR multiplex pour produire un produit de PCR chevauchant en une seule réaction pour générer la cassette d’expression sgRNA .
Nous avons également amplifié deux cassettes d’ expression de sgRNA through un seul cycle de PCR. Ensuite, la ou les cassettes d’expression sgRNA sont clonées dans les vecteurs binaires dans une réaction Gateway LR ou Golden gate. Le système rapporté ici fournit une procédure beaucoup plus efficace et plus easy pour construire des clones d’expression pour l’édition du génome médiée par CRISPR/Cas9. Dans ce protocole, nous décrivons les directions détaillées étape par étape pour l’utilisation de ce système.
Detectie en kwantificering van EGFR T790M-mutatie in vloeibare biopsieën door middel van digital druppel PCR
Contexte : La biopsie liquide permet l’ identification de mutations cancéreuses ciblables de manière minimalement invasive. Chez les sufferers atteints d’un most cancers du poumon non à petites cellules (NSCLC) avancé, la PCR numérique en gouttelettes (ddPCR) est de plus en plus utilisée pour génotyper le gène du récepteur du facteur de croissance épidermique ( EGFR ) dans l’ADN acellulaire circulant (cfDNA). Cependant, la sensibilité de cette méthode est encore débattue. Le however de cette étude était de mettre en œuvre et d’évaluer les performances d’un take a look at ddPCR pour détecter la mutation EGFR T790M dans les biopsies liquides.
Méthodes : Un take a look at ddPCR a été optimisé pour détecter la mutation EGFR T790M dans des échantillons de plasma de 77 sufferers atteints de CBNPC en development.
Résultats : Notre take a look at ddPCR a permis la détection et la quantification de la mutation EGFR T790M à une fréquence d’allèle cfDNA aussi faible que 0,5 %. La mutation a été détectée dans 40 échantillons de plasma, correspondant à un taux de positivité de 52 %. Le nombre de molécules mutantes par mL de plasma variait de 1 à 6 000. Une re-biopsie a été analysée pour 12 sufferers qui avaient un take a look at plasmatique négatif et la mutation a été détectée dans 2 cas. Une deuxième biopsie liquide a été réalisée chez 6 sufferers et la mutation a été détectée dans Three cas.
Conclusions : Cette étude met en évidence la valeur de la ddPCR pour détecter et quantifier la mutation EGFR T790M dans les biopsies liquides dans un environnement clinique réel. Nos résultats suggèrent que des assessments ddPCR répétés dans le cfDNA peuvent éviter une rebiopsie tissulaire chez les sufferers incapables de fournir un échantillon de tissu tumoral adapté à l’analyse moléculaire.
Een snelle en gevoelige fluorescentiebiosensor op base van plasmonische PCR
La PCR plasmonique utilisant des nanoparticules métalliques a montré de grands avantages par rapport à l’équipement de thermocycleur business en termes de coût, de taille et de temps de traitement . Cependant, en raison de la forte extinction de la fluorescence, la PCR à base de nanoparticules plasmoniques nécessite des étapes de post-traitement supplémentaires telles que la centrifugation et l’électrophorèse sur gel. Ce processus augmente le temps de diagnostic world, compensant ainsi les avantages du thermocyclage rapide. Nous rapportons ici une méthode de dosage par PCR photothermique plasmonique (PPT-PCR) rapide et wise basée sur la détection de fluorescence in situ à level ultimate.
En utilisant des nanoparticules magnétiques bifonctionnelles plasmoniques , la PPT-PCR impliquant 30 thermocycles et la détection de fluorescence après séparation magnétique a montré avec succès que les cibles d’ADN peuvent être détectées en 5,5 minutes. La limite de détection (3,Three copies par L) est comparable à celle de la PCR quantitative en temps réel classique ; cependant, le temps de dosage est environ 5,5 fois plus courtroom pour la PPT-PCR. La stratégie consistant à combiner l’ effet photothermique et la séparation magnétique en une seule particule ouvrira de nouveaux horizons dans le développement de biocapteurs rapides et sensibles basés sur la PCR pour les assessments au level de service.
Comorbiditeit en leeftijd worden in verband gebracht met aanhoudende COVID-19 PCR-positiviteit
Objectifs : L’impression de la démographie et des comorbidités sur la durée de la positivité de la PCR par écouvillonnage nasopharyngé COVID-19 reste incertain. L’objectif de notre analyse est de déterminer l’impression de l’âge, de l’admission en unité de soins intensifs (USI), des comorbidités et de l’origine ethnique sur la durée de positivité de la PCR COVID-19 chez les sufferers hospitalisés dans un grand groupe d’hôpitaux.
Méthode : Nous avons étudié 530 sufferers d’un grand système hospitalier et le délai jusqu’à la négativité de l’ARN du virus SARS-CoV-2 à tout second pendant l’hospitalisation ou après la sortie de l’hôpital était le critère d’évaluation principal. Nous avons inclus des sufferers de 18 ans ou plus qui ont été testés positifs pour COVID-19 lors d’une visite en hospitalisation, en ambulatoire ou aux urgences entre le 1er février 2020 et le 14 avril 2020.
Résultats : Dans l’ensemble, 315 (59,4 %) de notre inhabitants de sufferers ont continué d’avoir une PCR d’ARN du virus SARS-CoV-2 constructive Four semaines après le take a look at positif preliminary. Nous avons constaté que l’âge> 70 ans, la maladie rénale chronique, l’hypertension, l’hyperlipidémie, l’obésité ou la maladie coronarienne sont associés à une positivité persistante de la PCR pendant plus de Four semaines après le diagnostic preliminary.
Conclusion : L’ âge et la présence de comorbidités doivent être pris en considération lors de l’interprétation d’un take a look at PCR COVID positif.
